Lectura: ~3 min · Parte de la certificación gratuita en ciencia de péptidos
Un 99 % de pureza significa que hasta un 1 % del área del cromatograma es otra cosa. Saber qué suele ser esa «otra cosa» te ayuda a leer un COA con criterio. También explica por qué dos lotes con la misma pureza pueden no ser iguales.
Impurezas que vienen de la síntesis
En la síntesis en fase sólida, el péptido se arma pegando un aminoácido por ciclo, como un collar al que se le agrega una cuenta a la vez. Ningún ciclo sale perfecto al 100 %. Por eso aparecen estas impurezas típicas:
- Péptidos con deleción: les falta una pieza (residuo) porque una unión no se completó. Son las más difíciles de separar, porque se parecen mucho al producto correcto.
- Péptidos truncados: la cadena dejó de crecer antes de terminar.
- Diastereómeros: un aminoácido cambió a su "versión espejo" (de forma L a forma D) durante la unión; a esto se le llama racemización. Pesan exactamente lo mismo, pero tienen otra forma. Por eso la espectrometría de masas sola no los distingue.
- Grupos protectores residuales: restos de la química de síntesis que no se eliminaron por completo.
Impurezas por degradación
Son cambios que sufre el péptido con el tiempo o por mal manejo:
- Oxidación de metionina (+16 Da), triptófano o cisteína. El dalton (Da) es la unidad de masa de las moléculas; +16 Da equivale a ganar un átomo de oxígeno.
- Desamidación de asparagina o glutamina (+1 Da).
- Agregados (moléculas que se apelmazan entre sí) y productos de hidrólisis (fragmentos de la cadena rota por el agua).
Cómo se detectan
La herramienta de referencia es la HPLC acoplada a espectrometría de masas (LC-MS). La HPLC separa y mide cada pico. Luego la MS le asigna una masa a cada uno. Así se sabe si una impureza es una deleción (le falta la masa de un residuo concreto), una oxidación (+16) o una desamidación (+1).
El contraión: TFA frente a acetato
Los péptidos se purifican y se obtienen como sales. El ácido trifluoroacético (TFA) es el contraión habitual después de purificar por HPLC. Para obtener acetato hace falta un paso extra de intercambio. El contraión pesa dentro del polvo, pero no forma parte del péptido activo. Por eso:
- Hace que el contenido peptídico neto sea menor al 100 % del peso del vial.
- El TFA residual se considera indeseable en preparaciones para uso farmacéutico; por eso suelen cambiarse a acetato o cloruro.
Un COA completo muestra el cromatograma (no solo un porcentaje), la masa observada frente a la teórica, el número de lote, la fecha y el laboratorio que lo emitió. Un porcentaje sin cromatograma no te deja ver cuántas impurezas hay ni cómo se midieron los picos.
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