Lectura: ~2 min · Parte de la certificación gratuita en ciencia de péptidos
Saber que algo es muy puro no basta. Podrías tener un 99% de pureza… de la molécula equivocada. Para confirmar la identidad se usa la espectrometría de masas (MS), que mide el peso molecular con gran exactitud.
- Técnicas: las más usadas en péptidos son ESI-MS (ionización por electrospray) y MALDI-TOF. Ambas convierten la molécula en iones (partículas con carga eléctrica). Con la relación masa/carga (m/z) de esos iones se calcula la masa.
- Masa observada vs. teórica: la teórica se calcula con la secuencia del péptido; la observada es la que mide el equipo. Si coinciden, la identidad queda confirmada, como cuando un paquete pesa lo que dice su etiqueta.
- Dos formas de calcular la masa: la masa monoisotópica usa la versión más abundante (isótopo) de cada elemento. La masa promedio es un promedio ponderado de todas las versiones. En péptidos grandes, la diferencia entre ambas es notable, así que hay que saber cuál se está reportando.
- Análisis de aminoácidos (AAA): es una prueba de apoyo. Rompe el péptido en sus piezas (hidrólisis) y cuenta cuántas hay de cada aminoácido. Así confirma la secuencia y ayuda a calcular el contenido de péptido.
Un buen control usa las dos pruebas. La MS dice qué es (identidad, por la masa). La HPLC dice qué tan puro es (pureza, por el área del pico). Un COA serio presenta ambas, cada una con su gráfica: el espectro de masas y el cromatograma.
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